ВЛИЯНИЕ ДЭНС ЗОНЫ Е-З6 В ПЕРВУЮ ДЕКАДУ ЛУННОГО МЕСЯЦА НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЖИЗНИ МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR

ВЛИЯНИЕ ДЭНС ЗОНЫ Е-З6 В ПЕРВУЮ ДЕКАДУ ЛУННОГО МЕСЯЦА НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЖИЗНИ САМЦОВ МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR

Ю.В. ЗИНОВЬЕВ, С.А. КОЗЛОВ
ФГУ КИРОВСКИЙ НИИ ГЕМАТОЛОГИИ И ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ, г. КИРОВ, РОССИЯ

В предыдущих исследованиях было показано, что ДЭНС зоны Е-36 выносным электродом аппарата ДЭНАС в режиме «Тест» 1 раз в неделю продлевает жизнь мышей линии AKR [1, 2].
В настоящее время имеется новая модель аппарата ДЭНС - аппарат ДиаДЭНС-Т. Одно из отличий этого аппарата от предшественника заключается в том, что он дает возможность использовать для ДЭНС вместо двух шесть частот: 10,20, 60, 77, 140 и 200 Гц. Целью настоящей работы было выяснить, какая из названных частот является более эффективной для продления жизни мышей линии AKR.

Материал и методы исследования

Эксперименты проведены на самцах мышей линии AKR. Мыши были получены в лаборатории экспериментально-биологических моделей РАМН в 1999 году и с тех пор разводятся с помощью братско-сестринского скрещивания в лаборатории экспериментально-клинических исследований Кировского НИИ гематологии и переливания крови. Мыши сидели в общих клетках, получали обычный лабораторный корм и воду из автопоилок ad libidum, делились на группы случайным образом с ограничением на рандомизацию по возрасту и массе тела.

Шерсть в области зоны Е-36 обильно смачивалась 0,9% раствором NaCI. Обрабатывались обе лапы. ДЭНС проводилась выносным электродом аппарата ДиаДЭНС-Т при мощности 10 и продолжительности процедуры 15 сек. Мыши контрольной группы держались в руке в том же положении и такое же время, как и в опытной группе. Результаты экспериментов подвергались статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента, критериев для исключения выскакивающих значений вариант [3] и математического аппарата для планирования факторного эксперимента 22 [4].

Результаты и обсуждение

В первой серии экспериментов на 18 самцах поколений F 207-208 в возрасте 98,5±2.4 суток исследовалось влияние ДЭНС зоны Е-36 различными частотами аппарата ДиаДЭНС-Т на прирост массы тела мышей. Воздействие аппаратом осуществлялось в утреннее время с 8 до 10 часов. Перед этим мыши взвешивались, повторное взвешивание проводилось после 13 часов дня.
Мыши были разделены на 6 групп соответственно количеству частот аппарата ДиаДЭНС-Т. Они сидели в двух клетках по 9 штук в каждой. Всего было проведено по 8 сеансов у каждой мыши при мощности воздействия 10, длительностью 15 сек. Между четвертым и пятым сеансом был перерыв в 2 дня. а между шестым и седьмым — в один день. Таким образом, сеансы были проведены на протяжении одиннадцати дней.

Из таблицы 1 видно, что за те 5-6 часов, которые проходили между первым и вторым взвешиванием, масса тела мышей увеличивалась по-разному. Наибольший прирост массы выявлен у мышей, которым ДЭНС зоны Е-36 осуществлялась с частотой 200 Гц - 0.76±0,088 г (п=24) - таблица I. Он был достоверно выше по сравнению с другими частотами: 10 (Р<0.001), 20 (Р<0,001), 60 (Р<0,001), 77 (Р<0.Ь01) и 140 (Р<0.001).
Прирост массы тела у мышей, которым ДЭНС проводили при частоте 140 Гц, был достоверно выше по сравнению с 20 (Р<0,05), 60 (Р<0,05) и 77 (Р<0,01), но, как уже говорилось, достоверно ниже, чем у тех животных, которые получали ДЭНС при 200 Гц (таблица 1).
Необходимо отметить, что при ежедневной ДЭНС зоны Е-36 наибольший прирост массы тела наблюдался в первый день, на второй день он оставался практически без изменений, на третий день достоверно снижался, а на четвертый день возникал отрицательный прирост массы тела-минус 0,46±0,077 (п=18). Различнее первым днем высоко статистически достоверно - Р<0,001, таблица 2.

После двухдневного перерыва ДЭНС зоны Е-36 вновь вызывала значимый прирост массы тела (по сравнению с четвертым днем, Р<0,01). Однако этот прирост был достоверно ниже, чем в первый день. Прирост массы тела после шестой и седьмой процедуры достоверно не отличался от того, что отмечался после первой процедуры. После восьмой процедуры вновь имел место отрицательный прирост массы -0,17±0,081 г (п=18), который был достоверно ниже, по сравнению с приростом массы тела, как после первой, так и после седьмой процедуры (таблица 2).

Итак, вне зависимости от используемой частоты ДЭНС зоны Е-36 вызывает прирост массы тела через несколько часов после процедуры. Наибольший прирост массы тела при ежедневном ДЭНС зоны Е-36 наблюдается после первой и второй процедуры. Затем отмечается снижение эффекта и на четвертый день имеет место отрицательный прирост массы тела. После двухдневного перерыва прирост массы тела после ДЭНС зоны Е-36 возобновляется. Он отмечается после пятой, шестой и седьмой процедуры, а после восьмой вновь возникает отрицательный прирост массы тела, то есть масса тела не увеличивается, а уменьшается. Напрашивается вывод, что ежедневная ДЭНС зоны Е-36 приводит к избыточности воздействия и является слишком частой. При этом наиболее эффективной в плане прироста массы тела является частота 200 Гц. Именно при этой частоте наблюдается наибольший прирост массы тела при ДЭНС зоны Е-36 аппаратом ДиаДЭНС-Т (таблица 1). Вместе с тем, динамика изменения массы тела при этой частоте подчиняется ее волнообразному течению, свойственному всем остальным частотам аппарата ДиаДЭНС-Т: нарастание массы тела сменяется ее достоверными падениями (рис. 1). Падение массы тела после начального ее возрастания, очевидно, связано с избытком количества процедур. Передозировка, видимо, объясняется тем, что мыши очень чувствительны к стрессам, это очень пугливые животные. Сама процедура фиксации мыши в руке при проведении ДЭНС зоны Е-36 является сильным стрессом для этого животного. Как было показано работами Егоркиной С.В. и соавт. [5], ДЭНС обладает антистрессовым эффектом. Прирост массы тела после первой и второй процедуры, очевидно, является выражением этого эффекта. Последующие процедуры приводят к накоплению стресса и снижению эффекта от ДЭНС зоны Е-36. С этой точки зрения, исходя из всего сказанного, наибольшим антистрессовым эффектом из всех частот аппарата ДиаДЭНС-Т обладает частота 200 гц. Именно эта частота и была испытана во второй серии экспериментов.

Согласно рекомендациям Чжэн-Цзю терапии прижигания точки цзю-сань-ли для увеличения продолжительности жизни должны проводится в первую декаду лунного месяца [6]. Поэтому ДЭНС зоны Е-36 в этой серии экспериментов проводилась в первые 10 дней лунного месяца. Эксперименты были поставлены на 19 самцах мышей линии AKR поколений 207-209 в возрасте 141 ±2,5 суток. Они были разделены на контрольную и опытную группы, помещены в две клетки, в одну - 9, в другую - 10 мышей. В каждой клетке были и контрольные, и опытные мыши. Всего было проведено 4 курса ДЭНС. Поскольку первый курс был проведен до того, как были получены результаты предыдущей серии экспериментов, в нем использовалась ДЭНС выносным электродом аппарата ДЭНАС в режиме «Тест» на уровне 1. Зоны Е-36 для проведения процедуры выбривались. В остальных курсах процедуры ДЭНС зоны Е-36 проводились выносным электродом аппарата ДиаДЭНС-Т при частоте 200 Гц и мощности 10, зоны Е-36 не выбривались, а обильно смачивались 0,9% раствором NaCI, длительность процедуры - 15 сек. В контрольной группе зоны Е-36 0.9% раствором NaCI не смачивались, электроды к ней не прикладывались, мыши держались в руке в таком же положении и такое же время, как в опытной группе. В первом, втором и четвертом курсах было по 4 процедуры, повторявшиеся через 1-2 дня. В третьем цикле было 7 процедур, которые повторялись каждый день, за исключением трехдневного перерыва между второй и третьей процедурой.

При анализе полученных результатов привлек к себе внимание тот факт, что продолжительность жизни мышей зависела от того, в каком возрасте им был проведен первый курс ДЭНС. В этой связи с целью более объективной оценки полученных результатов для их анализа был использован математический аппарат плана факторного эксперимента 22. Контрольная и опытная группа были разделены еще на две. В результате получилось четыре группы. В двух из них средний возраст мышей на момент первого сеанса ДЭНС был равен 150±1,4 суток (п=9), в двух других - 133±2,7 суток (n= 10). Были выделены два фактора с двумя уровнями - верхним и нижним. Первый фактор (xl) — фактор ДЭНС-терапии: нижний уровень — отсутствие ДЭНС-терапии (-), верхний - ее наличие (+). Второй фактор (х2) - фактор возраста: нижний уровень — возраст мышей 133±2,7 суток (-), верхний уровень - возраст 150± 1,4 суток (+).

Таблица плана факторного эксперимента выглядит следующим образом.

План состоит из четырех опытов.
Опыт № I - оба фактора на нижнем уровне, вместо ДЭНС-терапии-ее имитация. Возраст мышей - 133±2,7 суток.
Опыт № 2 - первый фактор - на верхнем уровне, второй фактор - на нижнем: ДЭНС-терапия у мышей в возрасте 133±2,7 суток.
Опыт № 3 — первый фактор — на нижнем уровне, второй фактор - на верхнем: имитация ДЭНС-терапии у мышей в возрасте 150±1,4 суток.
Опыт № 4 - оба фактора на верхнем уровне: ДЭНС-терапия у мышей в возрасте 150± 1,4 суток.

По результатам эксперимента составлено уравнение регрессии типа: У = b0 + b1x1 + b2х2 + b12х1х2, где у - продолжительность жизни мышей; х1 - фактор ДЭНС-терапии; х2 - фактор возраста мышей; х1х2 - взаимодействие обоих факторов (ДЭНС-терапии и фактора возраста); b0 - первый член уравнения регрессии, среднее значение продолжительности жизни мышей всех четырех опытов факторного эксперимента; b1, b2, b12, стоящие перед знаками факторов, - коэффициенты, указывающие на силу влияния данного фактора. Если величина коэффициента равна или превышает определенное значение |b|, то такой коэффициент считается значимым и данный фактор оказывает статистически достоверное влияние на исследуемый показатель. Знак «плюс», стоящий перед коэффициентом, указывает на то, что под влиянием данного фактора продолжительность жизни мышей увеличивается, знак «минус» - на то, что под влиянием данного фактора она уменьшается. Обработка результатов второй серии экспериментов позволила вывести следующее уравнение регрессии.

у = 272 + 14х1 - 6,5х2 - 20,6х1х2|b| = 18,36. Из всех коэффициентов достоверен только один коэффициент взаимодействия двух факторов (х1х2): ДЭНС-терапии и возраста мышей. Он больше 18,36 и со знаком минус. Значит, чем старше мыши, тем в условиях нашего эксперимента меньше удлиняется их жизнь при ДЭНС зоны Е 36. И в самом деле, наибольшая продолжительность жизни наблюдалась в опыте № 2 плана факторного эксперимента, где ДЭНС зоны Е-36 проводилась мышам с возрастом 133±2,7 суток. Продолжительность жизни этих мышей была равна 315 суткам, &=±35,75, m=±15,99, n=5.

В опыте № 1 с имитацией ДЭНС у мышей того же возраста продолжительность жизни составляла 246 суток, c=±49,0, m=±21,90, n=5, различие со вторым опытом достоверно —Р<0,05.
В опыте № 3 с имитацией ДЭНС у мышей с возрастом 150±1,4 суток продолжительность жизни была равна 270 суток, c=±4,69, m=2,3, n=4, различие с опытом № 2 достоверно — Р<0,05.
В опыте № 4, где ДЭНС зоны Е-36 проводилась мышам возраста 150±1,4 суток, этот показатель составлял 257 суток, c=±27,53, m=± 12,31, n=5. Различие с опытом № 2 статистически достоверно, с опытом № 3 - недостоверно.

Таким образом, начало ДЭНС в возрасте 133 суток увеличивает продолжительность жизни мышей AKR, начало же ее в возрасте 150 дней - нет.
Мыши были помещены в общие клетки за три дня до начала ДЭНС, в первой клетке в возрасте 147 дней, во второй - 130 дней. Сразу же между ними начались драки за доминирование, которые с той или иной интенсивностью продолжались на протяжении всей их жизни. Самцы мышей линии AKR очень агрессивны, драки между ними заканчиваются травмами, а иногда даже гибелью отдельных особей. Другими словами, мыши в обеих клетках жили в условиях постоянного, сильного стресса. В этом отношении настоящая работа отличается от нашего первого исследования на ту же тему [1], где в эксперименте на 27 самках и 14 самцах было показано, что ДЭНС обеих зон Е-36 один раз в неделю выносным электродом аппарата ДЭНАС в режиме «Тест» продлевает жизнь мышей линии AKR. Самки мышей AKR, в отличие от самцов, полностью лишены агрессивности, в общих клетках они жили безо всяких эксцессов. Самцы же жили или в отдельных клетках, или попарно с самками, поэтому того стресса, который возникает при их совместном проживании, в первом исследовании не было. Стресс возникал только тогда, когда мышь брали в руку для того, чтобы провести процедуру ДЭНС. Но этот стресс был кратковременным - всего несколько секунд один раз в неделю.

Из всего сказанного следует вывод, что продлевающее жизнь мышей линии AKR действие ДЭНС зоны Е-36 имеет место как при отсутствии стресса, в условиях, так сказать, «мирной жизни», так и при его наличии, в условиях хронического сильного стресса, в состоянии, выражаясь словами Гоббса, «войны всех против всех», как при использовании аппарата ДЭНАС, так и ДиаДЭНС-Т, как при режиме «Тест» при частоте 10 Гц, так и при постоянном режиме при частоте 200 Гц, как при еженедельном однократном применении ДЭНС, так и при наличии нескольких ее процедур в течение нескольких дней в каждую первую декаду лунного месяца. Вместе с тем, на основании данного исследования нельзя сказать, какой из двух алгоритмов ДЭНС является более эффективным в плане продления жизни мышей линии AKR. так как они были изучены при разных условиях содержания мышей, один — в условиях хронического, сильного стресса, другой - в условиях его отсутствия. Стресс, вызываемый фиксацией мышей при проведении процедуры ДЭНС, мешает выявлению ее максимального эффекта на этот показатель.

Что же касается вопроса о том, почему в данном исследовании продлевающее жизнь действие ДЭНС на зону Е-36 зависело от того, в каком возрасте она начиналась, то механизм этого явления нуждается в своем более углубленном, детальном изучении.

Таблица 1. Средние значения изменения массы тела (в г) самцов мышей линии AKR
через 5-6 часов после ДЭНС зоны Е 36 различными частотами аппарата ДиаДЭНС-Т

Примечания. P140 — достоверность различия по сравнению с частотой 140 Гц:
Р200 — достоверность различия по сравнению с частотой 200 Гц

Таблица 2. Динамика изменении массы тела (в г) после каждой из восьми процедур
ДЭНС зоны Е 36 мышеи линии AKR вне зависимости от частоты воздействия

Примечание: * — достоверность различия по сравнению с первой процедурой;
** - достоверность различия по сравнению с предыдущей процедурой.

Рисунок I. Динамика изменений массы тела после каждой из восьми процедур ДЭНС зоны Е 36 мышей линии AKR.

Примечания. На оси абсцисс - номер процедуры. На оси ординат — изменение массы тела в г. Верхняя кривая - изменения массы тела для частоты 200 Гц. Нижняя кривая - для всех 6 частот аппарата ДиаДЭНС-Т

Литература

1. Зиновьев Ю.В., Малахов В.В., Козлов С.А. Продлевает ли жизнь динамическая электростимуляция биологически активной точки Е-36? Экспериментальное исследование. В кн.: «Динамическая электронейростимуляция. Новый виток спирали познания» // Материалы международного медицинского симпозиума, посвященного 7-летию корпорации «ДЭНАС МС». Екатеринбург. 11 февраля 2005.-С.51-54.
2. Зиновьев Ю.В., Малахов В.В., Козлов С.А. ДЭНС и проблема продления жизни // Рефлексотерапия (Научно-практический журнал ВАК). - 2005. - № 1. - С.28-30.
3. Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. - JT., изд-воЛГУ, 1971.-С.78.
4. Воробьев Ф.П., Голобородько Н.К., Мануйлова А.М. Математическое планирование эксперимента в биохимии и медицине. Харьков. - Издательское объединение «Вища школа»,- 1977. - С.20-27.
5. Егоркина С.Б., Сорокин А.В., Минаева Е.В., Исакова JT.C. Некоторые физиологические механизмы ДЭНС-терапии. - В кн.: Динамическая электронейростимулирующая терапия. Новые рубежи и итоги эмпирического этапа развития // Материалы международного юбилейного симпозиума, посвященного 5-летию корпорации «ДЭНАС МС». Под ред. В.В. Малахова. - Екатеринбург, 2003. С.32-37.
6. Овечкин А.М. Основы чжэнь-цзю терапии. - Саранский филиал СП «Норд», из-во «Голос». - 1991. - С.327.