ZdravPrav.ru
заботимся о вашем здоровье
Первая международная сеть специалистов по ДЭНС-терапии и врачей
Для совершения покупки просим перейти на новый наш сайт www.biodenas.ru
8 (800) 505 94 05 (беспл. по России)
8 (812) 923 46 03 (Санкт-Петербург)
8 (499) 677 53 55 (Москва)

ПРЯМАЯ КОНТАКТНАЯ ДЭНС ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ СОЛИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ У МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR

ПРЯМАЯ КОНТАКТНАЯ ДЭНС ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ СОЛИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ У МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR

Ю.В. Зиновьев, С.А. Козлов, ГУ Кировский НИИ гематологии и переливания крови, Киров

В.В. Малахов, НИИ конвексиальной медицины МАФО, Екатеринбург, Россия

В нашем сообщении, сделанном на международном симпозиуме, посвященном 6-летию корпорации ДЭНАС, сообщалось о результатах применения ДЭНС при двух экспериментальных злокачественных заболеваниях системы крови: лимфобластном и миелобластном сингенных перевивных лейкозах мышей линии AKR. Говорилось о том, что ДЭНС не обладает стимулирующим действием ни на лимфобластный, ни на миелобластный лейкозы. Напротив, были установлены данные о том, что есть основания говорить о тормозящем действии ДЭНС на течение миелобластного лейкоза (1). Настоящее исследование посвящено результатам прямой контактной ДЭНС злокачественный солидных опухолей у мышей линии AKR. Сингенные солидные опухоли вызывали у этих мышей с помощью подкожного введения взвесей селезеночных клеток, полученных от мышей, больных лейкозом.

Материалы и методы

Мыши линии AKR были получены в лаборатории экспериментально-биологических моделей РАМН в 1999 году и с тех пор разводятся с помощью братско-сестринского скрещивания в лаборатории экспериментально-клинических исследований Кировского НИИ гематологии и переливания крови. Опыты проведены на 20 самках и 22 самцах этих мышей поколений F 202-204. Они были разделены на 4 группы (2 контрольные и 2 опытные) случайным образом с ограничением на рандомизацию по возрасту и массе тела. В каждой группе было по 5 самок и 5 самцов. Два самца были использованы для получения лейкозных клеток. У одного из них был спонтанный лимфобластный лейкоз, у другого - перевивной миелобластный. Они были забиты декапитацией, стерильно у них были извлечены селезенки, из которых были приготовлены на 0,9% растворе хлористого натрия 1%-ные клеточные взвеси, каждая из которых в количестве по 0,5 мл была введена 20-ти мышам (контрольной и опытной группе) подкожно в переднюю брюшную стенку, предварительно для этого выбритую.

Мышам опытных групп ДЭНС проводили выносным электродом аппарата ДЭНАС в режиме «тест» (10 Гц) при энергетическом диапазоне 1 шаг, 1 раз в день, 5 дней в неделю. ДЭНС начинали на следующие дни после трансплантации селезеночных клеток. До появления опухоли воздействию подвергали то место передней брюшной стенки, куда была введена взвесь лейкозных клеток, с появлением опухоли воздействию подвергали эту же зону. За один сеанс проводили три воздействия выносным электродом с таким расчетом, чтобы места приложения электрода между собой не пересекались. Средняя длительность одного воздействия (до появления свето-звукового сигнала) составляла 11+0,3 сек. (п=б0). В контрольных группах проводились аналогичные процедуры выносным электродом от включенного аппарата.

Опухоли у большинства мышей оставались видимыми над кожей через неделю после введения им лейкозных клеток, через 12 дней они были уже у всех мышей. Опухолевый процессу мышей 1-ой серии экспериментов, которым под кожу были трансплантированы клетки лимфобластного лейкоза, носил более злокачественный характер: 2 самки из 10 погибли через 16 дней после инокуляции им лейкозных клеток. Поэтому все мыши с лимфобластными опухолями были забиты в этот день.
Мыши 2-й серии экспериментов, которым под кожу были введены клетки миелобластного лейкоза, были забиты на 22 сутки после инокуляции лейкозных клеток. Мышей забивали декапитацией, их вскрывали, вырезали опухоль, взвешивали ее и внутренние органы, в крови определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов (в камере Горяева), гемоглобин-циангемоглобиновым методом, в мазках крови, окрашенных эозином метиленовым типа Лейшмана и азурэозином по Романовскому, подсчитывали содержание отдельных форм лейкоцитов. Этим же методом красили мазки-отпечатки тимуса, селезенки, печени, брыжеечных лимфоузлов и подкожной опухоли, в которой подсчитывали количество бластных элементов.

Результаты исследований подвергали статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента и критериев для исключения выскакивающих значений вариант [2].

Результаты и обсуждение

Забегая вперед, можно сказать, что полученные в ходе проведенного исследования результаты свидетельствуют о том, что тот вариант ДЭНС, который был применен (режим «тест» энергетический диапазон «шаг 1») не оказывал стимулирующего действия на рост солидных опухолей мышей линии AKR. Более того, есть данные о том, что ДЭНС задерживает развитие опухолевого процесса у мышей с солидными опухолями миелобластной природы. Что касается опухолей лимфобластной природы, то по всем исследованным параметрам не было достоверных различий между животными контрольной и опытной группы этой серии экспериментов. Прежде всего, это касается массы опухоли и количества бластных элементов в них. Масса опухолей у мышей контрольной группы была равна 0,42±0,068 г (п=10), у мышей опытной группы - 0,39+0,069 г (п=10). Различие статистически недостоверно - Р >0,05 (табл. 1). Количество бластных элементов у них - 28+5,4% (п=10) и 29±3,6% (п=7) (табл. 2).

Таблица 1
Масса (г) подкожных опухолей и внутренних органов мышей с лимфобластными опухолями

с.п.

В.

опухоль

селезенка

тимус

сердце

почки

печень

брыж.

лимф.

п

10

10

10

9

10

10

10

М

К

0,423

0,367

0,167

0,138

0,343

2,16

0,485

m

0,0679

0,0185

0,0182

0,0074

0,0290

0,190

0,1056

п

10

10

9

10

10

10

10

М

0

0,390

0,347

0,196

0,140

0,348

1,89

0,497

m

0,0688

0,0289

0,0152

0,0110

'0,0345

0,169

0,0942

Примечание. С.П. - статистический показатель; В. - вариант; К - контольная группа; 0 - опытная группа; брыж. лимф. - брыжеечные лимфоузлы.

Таблица 2
Количество бластных элементов (%) в подкожных опухолях и внутренних органах мышей с лимфобластными опухолями

С.П.

В.

Опухоль

селезенка

тимус

печень

брыж. лимф.

п

10

10

10

10

9

М

К

28

68

52

56

66

m

5,4

4,8

8,8

5,7

4,6

п

7

8

8

7

7

М

0

29

58

59

43

55

m

3,6

5,0

7,7

2,8

5,6

Примечание. С. П. - статистический показатель; В. - вариант; К - контольная группа; 0 - опытная группа; брыж. лимф. - брыжеечные лимфоузлы.

Развившийся у мышей этой серии лимфобластный лейкоз также по своим характеристикам не имел различий между мышами контрольной и опытной группы. Об этом свидетельствует отсутствие статистически достоверных различий в массе селезенки, тимуса, сердца, почек и брыжеечных лимфоузлов у мышей, получавших ДЭНС (табл. 1). Количество лимфобластов в селезенке, тимусе, печени и брыжеечных лимфоузлах также было одинаковым в этих группах животных (табл. 2). Общее количество лейкоцитов, а также их отдельных форм в крови мышей с лимфобластными опухолями, не получавшими и получавшими ДЭНС, также статистически достоверно между собой не различалось (табл. 3). Другими словами, прямая контактная ДЭНС на развитие лимфобластных опухолей не оказывала ни стимулирующего, ни тормозящего воздействия.

Таблица 3
Количество отдельных форм лейкоцитов (х 109/л) в крови мышей с лимфобластными опухолями

С.П.

В.

общее

коли­

чество

лимфо­

циты

блас-

тные

элемен­

ты

грану-

лоциты

проми­

елоци­

ты

миело­

циты

метами­

елоциты

палоч­

коядер­

ные

сег-

менто-

ядер-

ные

п

8

8

10

9

10

10

10

10

10

М

К

5,32

2,98

0,17

2,43

0,00

0,00

0,55

1,06

1,16

m

0,463

0,316

0,061

0,432

0,000

0,000

0,115

0,178

0,348

п

7

7

7

6

7

7

7

7

7

М

0

6,56

2,93

0,09

2,81

0,00

0,04

0,72

1,31

1,25

m

0,964

0,338

0,033

0,557

0,000

0,029

0,206

0,358

0,446

Примечание. С.П. - статистический показатель; В. - вариант; К - контольная группа; 0 - опытная группа; брыж. лимф. - брыжеечные лимфоузлы.

Совсем другая картина наблюдается при прямой контактной ДЭНС миелобластных опухолей. И хотя масса опухолей при этом не меняется (табл. 4), однако содержание в них злокачественных бластных элементов достоверно уменьшается. В самом деле, если содержание миелобластов в опухолях у мышей контрольной группы составляет44±б,7%,то прямая контактная ДЭНС опухоли снижает это количество до 16+2,1% (Р <0,01, табл. 5).

Таблица 4
Масса (г) подкожных опухолей и внутренних органов мышей с миелобластными опухолями

С.П.

В.

опухоль

селезенка

тимус

сердце

почки

печень

брыж.

лимф.

п

10

10

10

10

10

10

10

М

К

0,72

0,322

0,173

0,138

0,319

1,76

0,248

m

0,072

0,0697

0,0223

0,0071

0,0244

0,106

0,0486

п

10

10

7

10

10

10

10

М

0

0,97

0,246

0,118

0,145

0,335

1,62

0,203

m

0,114

0,0640

0,0051

0,0078

0,0273

0,102

0,0481

Примечание. С.П. - статистический показатель; В. - вариант; К - контольная группа; 0 - опытная группа; брыж. лимф. - брыжеечные лимфоузлы.

Таблица 5
Количество бластных элементов (%) в подкожных опухолях и внутренних органах мышей с миелобластными опухолями

С.П.

В.

Опухоль

селезенка

тимус

.печень

брыж.

лимф.

п

К

9

9

9

9

9

М

44

53

38

31

30

m

6,7

12,5

12,6

8,6

10,8

п

0

8

9

9

9

9

М

16

36

17

25

17

m

2,14

10,8

6,4

7,6

8,0

Примечание. С.П. - статистический показатель; В. - вариант; К - контольная группа; 0 - опытная группа; брыж. лимф. - брыжеечные лимфоузлы.

Таким образом, налицо существенное различие в прямой контактной ДЭНС лимфобластных и миелобластных опухолей. В миелобластных опухолях ДЭНС существенно снижает содержание злокачественных клеток, в лимфобластных - нет.

Наряду с вопросом о том, в чем причина такого различия, возникает и другой вопрос, а не могло ли количество миелобластов в опухоли быть результатом усиленного метастазирования этих клеток в органы и ткани организма под влиянием ДЭНС? Если бы это было так, то, очевидно, у мышей, получавших ДЭНС, масса отдельных органов и содержание в них миелобластов были бы больше, чем у тех, что ее не получали. Однако это не так. Как свидетельствуют данные, указанные в табл. 4, существенных различий в массе органов, за исключением тимуса, между мышами, получавшими и не получавшими ДЭНС, не было. А масса тимуса у мышей, получавших ДЭНС, была даже достоверно (Р<0,01) меньше, чем у тех, что ее не получали (табл. 4). Количество миелобластов в селезенке, тимусе, брыжеечных лимфоузлах и печени мышей, получавших ДЭНС, значимо не отличалось от не получавших ее, хотя во всех случаях было меньше (табл. 5). Другими словами, предположение о том, что уменьшение количества миелобластов в опухолях, подвергшихся прямой контактной ДЭНС, обусловлено их метастазированием, не имеет под собой оснований.

Об этом свидетельстdует и картина крови, представленная в табл. 6, из которой видно, что количество миелобластов и других молодых форм лейкоцитов миелоидного ряда в крови мышей, миелобластные опухоли которых подвергались прямой контактной ДЭНС, достоверно меньше, чем у таких же мышей, миелобластные опухоли которых прямой контактной ДЭНС не подвергались.

Таблица 6
Количество отдельных форм лейкоцитов (х 109/л) в крови мышей с миелобластными опухолями

С.П.

В.

общее

коли­

чество

лим­

фо­

циты

блас-

тные

эле­

менты

гра-

нуло-

циты

про-

мие-

лоци-

ты

мие­

лоци­

ты

мета-

мие-

лоци-

ты

па-

лочко-

ядер-

ные

сег-

менто-

ядер-

ные

п

К

9

7

9

9

9

9

9

9

9

м

54,40

4,73

11,00

41,46

9,23

9,00

9,00

5,00

0,64

m

20,472

1,360

4,65

16,99

3,82

2,949

3,803

3,074

0,291

п

0

б

9

9

6

9

9

9

9

9

М

4,48

6,81

1,56

1,92

1,58

2,16

3,13

2,1

0,65

m

0,655

2,233

0,931

0,257

1,005

1,500

1,981

1,150

0,142

Р

<0,05

<0,05

Примечание. С.П. - статистический показатель; В. - вариант; К - контольная группа; 0 - опытная группа; брыж. лимф. - брыжеечные лимфоузлы.

Следовательно, прямая контактная ДЭНС миелобластных солидных опухолей не только уменьшает количество миелобластов в них, но и уменьшает количество этих клеток в крови мышей. Другими словами, в отличие от прямой контактной ДЭНС солидных лимфобластных опухолей, прямая контактная ДЭНС миелобластных солидных опухолей оказывает тормозящее влияние на развитие всего солидного процесса.

Это согласуется с результатами предыдущих исследований [1], в которых было показано, что ДЭНС задерживает развитие миелобластного и не влияет на течение лимфобластного (не тормозит и не стимулирует) сингенных перевивных лейкозов мышей линии AKR. Это особенно интересно в связи с тем обстоятельством, что в экспериментах с лейкозами использовали другой вариант ДЭНС: воздействие выносным электродом на переднюю брюшную стенку по методике креста в режиме «терапия» (77 Гц) при энергетическом диапазоне, равном 5 шагам в течение 5 минут [1]. В настоящем исследовании прямое троекратное воздействие на опухоль выносным электродом аппарата ДЭНАС осуществлялось в режиме «тест» (10 Гц) на первом шаге энергетического диапазона в общей сложности в течение 30 сек. Следует заметить, что воздействия - разные по частоте, по мощности, по длительности, а результаты - одинаковые; наблюдается торможение миелобластных опухолевых процессов и отсутствует влияние налимфобластные. В чем причина этого явления? При ответе на этот вопрос следует иметь в виду, что хотя характеристики ДЭНС были разные, однако зона, на которую она была направлена, была одна и та же - передняя брюшная стенка. Какой вывод можно сделать из данного обстоятельства?

С нашей точки зрения, сказанное свидетельствует в пользу предположения о том, что в наших экспериментах более важное значение имели не физические характеристики ДЭНС, а та зона, на которую она была направлена. Передняя брюшная стенка оказалась подходящим местом для получения положительного результата при ДЭНС миелобластных опухолевых процессов, и не той зоной, на которую надо воздействовать аппаратом ДЭНАС, чтобы получить положительные результаты при лечении лимфобластных опухолевых процессов. Вполне вероятно, однако, что такие зоны существуют. Нужно только их найти. Это, по нашему мнению, может быть одним из направлений дальнейших экспериментальных исследований.

Литература

  1. Зиновьев Ю.В., Малахов В.В., Козлов С.А. Результаты применения ДЭНС-терапии при экспериментальных злокачественных заболеваниях системы крови мышей линии AKR. В кн.: Динамическая электронейростимулирующая терапия. Эволюция продолжается. Материалы международного симпозиума, посвященного б-летию корпорации «ДЭНАС МС». - Екатеринбург, 2004. - С.65-73.
  2. Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. Л. - Издательство ЛГУ. - 1971. - С.14-16 и С. 62.